什么時(shí)候需要穩(wěn)定細(xì)胞株？

　　以下實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株而不是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染更能滿足實(shí)驗(yàn)要求：

　　1)外源片段在分裂細(xì)胞中長(zhǎng)期(>2周)穩(wěn)定表達(dá)。雖然普通轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)一般只能保證2-4天的轉(zhuǎn)染和表達(dá)效率，但腺病毒載體在多數(shù)分裂細(xì)胞中可以維持2-4周內(nèi)的高轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)周期。而非分裂細(xì)胞，可以使用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)外源基因，因?yàn)橄傧嚓P(guān)病毒載體在許多非分裂細(xì)胞中可以保持長(zhǎng)達(dá)1年的高效表達(dá)。

　　2)需要構(gòu)建使用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)，這主要是由于：

　　a)過(guò)表達(dá)基因或者干擾目的基因引起細(xì)胞毒性或者抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等不利因素;

　　b)目的基因的過(guò)表達(dá)或者干擾需要時(shí)空特異性。

　　3)希望控制目的基因過(guò)表達(dá)或者干擾的拷貝數(shù)，以避免引入人為因素影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性。構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

　　4)部分細(xì)胞種類，病毒載體亦無(wú)法達(dá)到高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定株，達(dá)到外源片段的高效表達(dá)。

　　5)長(zhǎng)期在少數(shù)幾類細(xì)胞中研究幾個(gè)基因的功能，通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定株，可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本，也極大方便實(shí)驗(yàn)研究。

　　6)部分蛋白穩(wěn)定性*，瞬時(shí)RNA干擾因?yàn)樽饔弥芷诙蹋荒芤种颇康幕虻谋磉_(dá)，但無(wú)法去除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白，所以需要通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定株實(shí)現(xiàn)更好的基因干擾效果。

　　7)需要往動(dòng)物體內(nèi)注射表達(dá)有外源片段的細(xì)胞。需要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株，以防止注射入動(dòng)物體內(nèi)后，很快外源片段表達(dá)丟失。

　　8)細(xì)胞個(gè)體差異(同一類細(xì)胞，不同個(gè)體細(xì)胞基因組存在差異)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有干擾，需要構(gòu)建單克隆細(xì)胞株去除干擾。

　　9)需要將外源片段插入基因組中，比如基因敲除，基因插入突變篩選等修飾基因組的實(shí)驗(yàn)。